Jeśli używasz biotyny-NHS do koniugacji z białkami, nie używaj Tris jako buforu, ponieważ zawiera on grupy azotowe i może ugasić reakcję. PBS lub HEPES jako
Poniżej znajduje się krótki protokół procedury subklonowania: Przeanalizuj miejsca restrykcyjne wektora, z którego chcesz przenieść gen do wektora docelowego – miejsca restrykcyjne powinny być obecne
Wziąć 10 ml Sepharose 2B i przemyć kilkakrotnie wodą przez odwirowanie. Nie wirować zbyt szybko, ponieważ może to złamać kulki Sepharose. Odwirować wystarczająco szybko, aby
10x sól fizjologiczna buforowana fosforanem PBS (do usuwania metanolu z blotów)NaCl 80g (1,37 M na 10x)KCl 2g (27mM dla 10x)Na2HPO4 (80 mM dla 10x)KH2PO4 (20
TBS20 mM Tris, pH 7,4150 mM NaCl TBS Tween TBST (do przemywania plam)TBS 2LTween-20 (brązowa butelka) + 1 ml przez wlanie pipetą pipetą lub plastikową
Ogólny protokół redukcji cystein w roztworze białka lub peptydu Przygotuj 1 M roztwór podstawowy diotreitolu DTT w wodzie, najlepiej świeży. (Staraj się nie wdychać DTT.)